抗酸染色液操作方法!
產品簡介:
抗酸染色用于細菌標本涂片或菌落涂片的染色。常用于對分枝桿菌屬進行初步鑒別。普通細菌染色比較容易著色,而分支桿菌細胞壁含脂質較多,染色比較困難,必須加熱才能被Carbolfuchsin solution著色。分枝桿菌菌體著色后,能抵抗鹽酸酒精等酸性脫色劑的脫色,而其他細菌和細胞等均被脫色。當再用堿性美藍復染后,分支桿菌仍為紅色,其他細菌與背景呈藍色。
試劑盒組成:
抗酸染色液A 50ml/100ml/250ml
抗酸染色液B 50ml/100ml/250ml
抗酸染色液C 50ml/100ml/250ml
規格:3×50ml/3×100ml/3×250ml
保存:室溫干燥保存,有效期3年。
抗酸染色的原理:
分枝桿菌的細胞壁內含有大量的脂質,包圍在肽聚糖的外面,所以分枝桿菌一般不易著色,要經過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結合后,就很難被酸性脫色劑脫色,故名抗酸染色。
齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復紅牢固結合成復合物,用鹽酸酒精處理也不脫色。當再加堿性美蘭復染后,分枝桿菌仍然為紅色,而其他細菌及背景中的物質為藍色。
操作步驟:
1、 做一適當厚度的涂片,干燥后火焰固定。
2、 滴加抗酸染色液A于玻片上,覆蓋住樣本,在酒精燈上加熱,切勿沸騰,出現蒸汽即暫時移開,必要時可續加染色劑以免干涸。加熱3-5分鐘。
3、 移開火,靜置5分鐘,待標本冷卻后以自來水沖洗。
4、 用抗酸染色液B脫色(大約1分鐘)至無紅色染液脫出為止。*脫色可避免產生假陽性結果。
5、 自來水緩慢沖洗后,滴加抗酸染色液C復染約30秒,水洗。
6、 待干后油鏡觀察。
預期結果:
抗酸菌被染成紅色,為抗酸陽性;其它細菌染成藍色,為抗酸陰性。背景細胞及雜質也被染成藍色。
注意事項:
1. 染色程度可通過改變染色時間或染色溫度做適當調整。
2. 每次試劑用完后,請迅速蓋好,以免揮發。
3. 本產品有一定的刺激性和腐蝕性,使用時請穿實驗服并戴一次性手套操作。
抗酸染色液操作方法!